Α-葡萄糖苷酶详细技术参数
一 产品介绍
外 观: 白色微黄的无定形粉末
比 活 性: ≥10U/mg
稳 定 性: 20℃至少稳定一年
分 子 量: 大约65KD
cas:9001-42-7
等 电 点: 5.2
米氏常数: 6.3 x 10–4
M(PNPG)
抑 制 剂: 不受叠氮钠的抑制
pH稳定性: 5.5~9.5 (Fig.3 1)
适 pH: 7.5 (Fig.3 2)
适温度: 大于65℃ (Fig.3 3)
热稳定性: 55℃以下稳定 (Fig.3 4)
Α-葡萄糖苷酶二 、酶活测定方法
1. 原理
p Nitropheny1 a D glucopyranoside (PNPG) + H2O a D glucose+P Nitrophenol (PNP)
PNP 在405nm处有特异吸收,通过测定在405nm处吸光度的变化速率计算该酶的活性。
2. 定义 1个酶活单位是指在以下反应条件下1分钟生成1微摩尔PNP的酶量,表示为1个单位。
3. 检测方法 检测方法 检测方法 检测方法
3.1 样品稀释液的配制 样品稀释液的配制 样品稀释液的配制 样品稀释液的配制
在 800毫升去离子水中,加入 27.2 克磷酸二氢钾,用氢氧化钾调节 pH=7.0(25℃)左右,加 0.37
克EDTA.2Na、3.00克Thesit、1.00 克叠氮钠搅拌溶解,用氢氧化钾或盐酸调节pH=7.0±0.05(25℃),
定容至1升。
3.2 酶活检测试剂的配制 酶活检测试剂的配制 酶活检测试剂的配制 酶活检测试剂的配制
在 800 毫升去离子水中,加入 13.6 克磷酸二氢钾、用氢氧化钾调节 pH=7.0(25℃)左右,加 1.50
克“4 Nitrophenyl a D gluco pyranoside”、1 克叠氮钠,搅拌溶解,调节 pH=7.0±0.05(25℃), ,, ,定容至 1
升。
3.3 待测样品的配制
检测前用卧氏称量管称量所需酶,酶称量时,应至少称量10mg的酶,以保证称量的准确性。用酶
稀释液溶解,定容到配制体积。
3.4Α-葡萄糖苷酶 酶活检测步骤
按以下要求加入试剂:检测试剂0.900ml,37℃预热60秒,加入0.018ml待检样品,迅速搅拌均匀,
1 分钟后,在 405nm 测定 180 240 秒内吸光度的变化率。此法酶的线性为 100 800U/L,建议检测时用
200 400U/L之间的标本进行检测。
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