谷氨酸脱氢酶(EC 1.4.1.2)（来源于基因工程菌)详细说明书
一、产品介绍
外 观： 白色微黄的无定形絮状物
比 活 性： ≥20U/mg
稳 定 性： 20℃至少稳定一年
分 子 量： 大约50KD
cas号码:9029-12-3
等 电 点： 5.92
米氏常数： 10.4×103
mol/L（以NN4Cl为底物）；7.42×103
mol/L（以α酮戊二酸为底物）；
6.65×104
mol/L（以NADH 为底物）
抑 制 剂： 不受叠氮钠的抑制
pH稳定性： 5.0～10.0 （Fig.31）
适 pH： 7.0～8.0 （Fig.32）
适温度： 45℃左右 （Fig.33）
热稳定性： 50℃以下 （Fig.34）
二 酶活测定方法
1. 原理
αketoglutarate + NH3 + NADH + H+
LGlutamate + NAD + H2O
2. 酶活定义 酶活定义 酶活定义 酶活定义
1个酶活单位等于在以下反应条件下1分钟消耗1微摩尔NADH 的酶量，为1单位。
3. 检测方法 检测方法 检测方法 检测方法
3.1 样品稀释液的配制 样品稀释液的配制 样品稀释液的配制 样品稀释液的配制
在800毫升去离子水中，加入30克Tris搅拌溶解，用盐酸调节pH 到7.80，加0.74克EDTA·
1 克牛血清白蛋白、1 克叠氮钠、4.0 克 TritonX100，搅拌溶解，用盐酸调节 pH 到 7.80（25℃）
到1升。2-8度保存。
3.2 酶活检测试剂配制方法 酶活检测试剂配制方法 酶活检测试剂配制方法 酶活检测试剂配制方法
GLDH
3.2.1 试剂 试剂 试剂 试剂1 的配制 的配制 的配制 的配制
在800毫升去离子水中加入6.06克Tris搅拌溶解，用盐酸调节pH 到8.45，加5.349克氯化铵、 1.00
克叠氮钠，用盐酸调节pH到8.30±0.05（25℃），加0.70克α酮戊二酸，搅拌溶解，定容至1升，再次
GLDH 确认pH并用盐酸微调节到8.30±0.05，28度保存。
3.2.2 试剂 试剂 试剂 试剂2 的配制 的配制 的配制 的配制
在800毫升去离子水中，加入21.1克CAPS 搅拌，用氢氧化钾调节pH 到9.6±0.1，加1.0克牛血清
白蛋白、2.0 克叠氮钠搅拌溶解，溶液冷却到 28℃，加 1.4 克 NADH 搅拌溶解，加水到 1 升，用氢氧
化钾或盐酸调pH到9.6±0.1，28度保存。
3.2.3 待测样品的配制 待测样品的配制 待测样品的配制 待测样品的配制
检测前用卧氏称量管称量所需酶，酶称量时，应至少称量10mg的酶，以保证称量的准确性。用样
品稀释液溶解，定容到配制体积。此稀释液需在稀释后120分钟内测定完成。
3.2.5 酶活检测步骤 酶活检测步骤 酶活检测步骤 酶活检测步骤
按比例依次加入以下试剂：0.9ml 的试剂 1，0.18ml 的试剂 2，37℃预热 60 秒，4 分钟后加待测酶
液
0.015ml，在 340nm 测定 1 分钟内吸光度的变化率。此法酶的线性为（1001000）U/L，建议检测时用
（100500）U/L之间的标本进行检测。
3.2.6 酶活力计算公式 酶活力计算公式 酶活力计算公式 酶活力计算公式
酶活力（U/L）= △A/min×Vt× D×1000 =△A/min×11736×D
ε×Vs×d
Vt ：反应液总体积 （1.095ml）
ε ：摩尔吸光系数 6.22（cm2
/micromole）
Vs ：待测酶液的体积 （0.015ml）
d ：比色杯光径 （1cm）
D ：稀释倍数
△A/min ：△A/min（待检样品） －△A/min（空白）（单位：ABS/min）